载脂蛋白(apolipoprotein,apo)是血浆脂蛋白中的蛋白质,其基本功能是运载脂类。apoB由于氨基酸组成的差异,可分为以下亚类:apoB48和apoB100。apoB48是乳糜微粒(CM)的载脂蛋白之一;apoB100是极低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL)的载脂蛋白之一。
载脂蛋白AⅠ(apoAⅠ)是高密度脂蛋白(HDL)的主要蛋白质组分,在HDL介导的胆固醇逆向转运中发挥重要作用。apoAⅠ氨基酸残基144~186为卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)主要激活域,通过激活LCAT,促进胆固醇逆向转运。故apoAⅠ是LCAT激活剂,A正确。
脂必妥片药理研究揭示了其在预防和治疗高脂血症、动脉粥样硬化等方面的有效性。
通常,细胞裂解液由多种成分组成,以确保细胞的完整性和蛋白质的有效提取。
对于组织裂解液,常见成分包括Tris-HCL(50 mM,pH 4)、NaCl(150 mM)、去氧胆酸钠(0.25%)、非离子洗涤剂(如NP-40或Triton X-100,1%)以及蛋白酶抑制剂(如EDTA、PMSF、Aprotinin、Leupeptin和Pepstain)。需要注意的是,蛋白酶抑制剂应现场配制并立即使用,因为它们容易失效。
50 mmol/L Tris-HCl:作为缓冲液,维持细胞裂解过程中的pH值稳定。Tris是一种有机碱,能够抵抗酸碱变化,保持溶液的酸碱平衡。 0 mmol/L EDTA:作为金属螯合剂,有助于稳定溶液中的金属离子。EDTA能够与金属离子形成稳定的螯合物,防止金属离子对细胞裂解过程的干扰。
裂解液的主要成分:去垢剂 去垢剂是裂解液中的关键成分,其特点在于具有两亲性结构。去垢剂分子由亲水性的“头部”和疏水性的“尾部”组成,这种结构使得去垢剂能在水性环境中形成胶束。在较高浓度下,去垢剂的极性部分朝向水分子,而疏水部分则聚集在一起,形成一个以疏水核心为特征的稳定结构。
原因是酚氯仿可以使蛋白质变性,从而从溶液中析出,但是蛋白密度会小于酚氯仿,所以离心后它分布在中间;而DNA溶于水而不溶于有机相。沉淀DNA用无水乙醇,是因为DNA不溶于乙醇,而乙醇可以夺取水,从而使得DNA聚集沉淀,如果用乙醇沉淀的话一定要用2倍以上的无水乙醇。也可以用异丙醇沉淀。
无水乙醇作为理想的沉淀剂,能够安全地与DNA相互作用。当DNA溶液中的水分子被乙醇夺走时,DNA会脱水并易于聚合,从而实现DNA的沉淀。乙醇的这一特性使得它成为植物DNA提取过程中不可或缺的试剂。氯仿在植物DNA提取过程中主要用于克服酚的缺点,并加速有机相与液相的分层。
氯仿的作用是有助于水相与有机相分离和除去DNA溶液中的酚。抽提后的DNA溶液用2倍体积的无水乙醇在NaCl存在下沉淀DNA,回收DNA用70%乙醇洗去DNA沉淀中的盐,真空干燥,用TE缓冲液溶解DNA备用。