肝脏组织蛋白裂解
1、关于裂解液 ，我们是先配一个2*的裂解液，用之前用单蒸水稀释为1*，用于肝脏组织的裂解。
2、实验步骤：1）把小鼠肝脏组织剪切成细小的碎片。取绿豆样大小的组织块加入裂解液0.5ml（裂解液中加入蛋白酶抑制剂）。2）用组织破碎仪或者玻璃匀浆器匀浆，直至组织充分裂解没有大的组织块。 3）冰上消化20-30min，期间每隔5-8min要涡旋一下，使得裂解更加充分。
3、步骤 将每份EP管填充最多100 mg组织，按照100 mg/1 mL的比例加入裂解液。步骤 裂解液配方为：50 μL RIPA + 5 μL蛋白酶抑制剂 + 5 μL磷酸酶抑制剂 + 0.5 μL PMSF。步骤 使用两个50 mL烧杯，一个用于放置生理盐水清洗匀浆器，另一个用于放置EP管。每次匀浆2s或5-8s。
4、你好，提取总蛋白需要蛋白酶抑制剂和裂解液。一般是1：1进行配制。用的裂解液我们是RIPA。将组织用液氮研磨碎了，然后按量加入裂解液，细胞量在10七次方左右是100微升。冰浴裂解20分钟（间断摇动）。然后4摄氏度离心12000rpm，15分钟。吸取上清定量。
5、RIPA裂解液，也称为RIPA Lysis Buffer，是一种传统的细胞组织快速裂解液。 使用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可用于常规的Western blot、免疫沉淀（IP）等实验。 使用RIPA裂解液处理培养细胞时，需先融解裂解液，并在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度达到1mM。
6、在冰上取50-100mg组织剪成碎片，用预冷的PBS洗涤2次，离心弃去PBS。 加入0.5-1mL预冷的蛋白裂解液。 使用玻璃匀浆器在4℃下匀浆20-40次，直至95%的细胞被破碎。然后在冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪震荡30秒。
内参配制方法
内参配制方法：WB操作简单，既可以定性分析表达产物，同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。作为一种有活性的生物大分子，抗体和抗原的反应是比较复杂的，因此用来测定表达产物时存在着一定的不确定性。所以，在WB实验设计中加入良好的参照体系，对实验结果分析是非常有帮助的。
孵二抗。就简单多了。按说明书1：5000稀释，于是乎，二抗和二抗稀释液的配比是1ul和5000ul，继续常温孵化了2h。回收二抗。TBST洗膜三遍，5minX3次。ECL曝光。今天很幸运，在曝光的时候碰到之前认识的一个小兄弟HMT，还认真地教我一遍，包括具体的方法及其选择事由。
内参用于优先计算靶基因的相对表达量，消除总RNA量差异引起的表达假性差异。相对定量比较同一基因在样本间的表达差异，无需精确拷贝数，关注与未处理样品组的表达变化。ΔΔCt方法通过比较目的基因Ct值与内参Ct值计算ΔCt，得到实验组与对照组的ΔΔCt，表示目的基因表达水平的倍数差异。
RNase-free water：无Rnase的水。制备方法是将DEPC按照0.01%（V/V）加入d H2O中500ml，37℃下过夜，并高压灭菌。 一次性塑料手套。关于Trizol Reagent的使用过程： 匀浆化（Homogenization）：对于组织样本，每100mg组织加入1ml Trizol试剂，样品体积不得超过Trizol试剂的10%。
同时，建议使用新鲜的抗体配制二抗，并避免重复使用。洗膜时应遵循1XTBST洗3次，每次5分钟的步骤，过度洗膜可能会降低靶标信号。在选择内参时，需要考虑到内参蛋白的表达是否在所有情况下均一，以避免因细胞条件变化导致的异常结果。
注：Western结果通常需要提供内参作为对照，通常可以选用Tubulin抗体（AT819）或Actin抗体（AA128），进行内参检测。 二抗孵育（Secondary antibody inucubation）参考二抗的说明书，按照适当比例用Western二抗稀释液（P0023D）稀释辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗。
急切求解WB,IHC的意思!
WB指的是Western Blot，即Western免疫印迹法，用于检测蛋白质。它首先将蛋白质从细胞或组织中分离出来，并转移到膜上。然后，使用特定的抗体来检测目标蛋白的存在。对于已知的表达蛋白，可以使用相应的抗体作为第一抗体；对于新基因的表达产物，可以通过融合部分的抗体来检测。
DAB有致癌的潜在可能，操作时要小心仔细。（二）IHC免疫组织化学 IHC免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。
WB：whole blood 全血（即未经任何方式分部分离的血液）Western Blot，“Western免疫印迹法”。是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。