本文目录：
- 1、如何进行Caspase-3活性的流式细胞术检测
- 2、流式细胞仪检测需要哪些试剂耗材
- 3、藻细胞进行流式细胞检测之前应该怎么处理
- 4、质谱流式细胞技术简介
- 5、流式细胞仪观察细胞周期样品怎样准备
- 6、流式细胞术,你这磨人的小妖精
如何进行Caspase-3活性的流式细胞术检测
荧光染料和caspase-3的底物结合，加入细胞培养液，细胞可以自由摄入。进入细胞后，底物被活化的caspase3或者7降解后，释放的荧光染料进入细胞核，染色DNA。流式细胞仪检测，只要是和阴性对照相比荧光信号增高的，就是有caspase激活的。荧光强度越高，酶的活性越强。
如果是测细胞内抗原的，比如抗体识别活化caspase-3， 那就要固定。其他检测功能的，比如caspas3-3活性的，就要活细胞来测试。
caspases是一组存在于细胞质中具有类似结构的蛋白酶。它们的活性位点均包含半胱氨酸残基，能够特异性切割靶蛋白天冬氨酸残基后的肽键。因此caspases意为“天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶”。caspases负责选择性地切割某些蛋白质，切割的结果是使靶蛋白活化或失活，而非完全降解。
流式细胞仪检测方法 直接免疫荧光标记法 取一定量细胞（约1×10^6细胞／ml），直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应（如做双标或多标染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入），孵育20-60分钟后，用PBS（pH2－4）洗1-2次，加入缓冲液重悬，上机检测。
有活性的Caspase-3的蛋白长度与未激活状态的Caspase-3是不同的。未激活的Caspase-3是通常所说的proCaspase-3，它在激活后产生有活性的Caspase-3。具体有相关文献可以查阅。因此你做的引物应该是不一样的。
细胞周期的检测方法是简便直观的碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）染色-流式分析法。
流式细胞仪检测需要哪些试剂耗材
1、流式细胞仪通过检测细胞的物理化学特性，精确解析细胞周期的每个阶段。以HeLa细胞为例，实验材料包括细胞、试剂和耗材，步骤包括消化、洗涤、固定、染色处理后，通过流式细胞仪进行高效分析。对细胞保存也有讲究，如胃组织可用乙醇固定，而乳腺细胞DNA则推荐70%冰乙醇短期保存。
2、在凋亡发生的各个过程当中，都有相应的流式细胞仪的检测方法，可以采用以下检测方法：线粒体功能 DNA Cycle Caspases Annexin V Assay DNA Fragmentation Assays 基本上涵盖了细胞凋亡的各个期，对各种检测方法的原理和特点做一个简单介绍。
3、转染了GFP的细胞不能用FITC标记的Annexin V，因为FITC和GFP在流式细胞仪上是同一通道检测，无法区分，必须选用其他荧光素标记的Annexin V，比如APC、PE等。BD的凋亡检测试剂盒不错。
4、CFDA染料。细菌先经碱性染料结晶紫染色，而后经碘液进行媒染，之后用酒精脱色，在一定条件下有的细菌媒染后的颜色不会脱去，有的可以被脱去。其实还有一种方法，能更有效的鉴别与分析活细菌与死细菌，即古朵生物推荐的活细菌染色试剂盒，流动流式细胞术活细菌检测试剂盒以及活细菌荧光成像试剂盒。
5、同型对照则是为了查看抗体非特异性结合的水平。选择同型对照需要注意采用相同物种、相同亚类、相同染料、相同浓度，否则，检测的时候会出现乱七八糟的同型对照结果。选择合适的抗体 通用原则是：为表达最弱的抗原选择染色指数最高的荧光素。根据使用的流式细胞仪性能、激光器、滤光片种类来选择。
藻细胞进行流式细胞检测之前应该怎么处理
流式检测的是单个细胞，所以你的样本要是单个细胞悬液。如果是来源于组织或者贴壁培养的，需要注意在分离细胞时避免破坏细胞。保持细胞膜表面的完整性。不要过度消化。还有你处理的细胞要保持你所需要检测的本来面目。比如检测凋亡，贴壁细胞不宜用annexin方法，因为会导致大量的假阳性。
加入溶血素1ml，震荡后室温避光10分钟。离心，1200转， 5分钟。弃上清，震荡。加入PBS洗液2ml，震荡，离心，1200转， 5分钟。弃上清，震荡。加入PBS 900l。上机前4度保存。上机。
一般情况下没有必要，除非对样本做刺激等前处理。但是用来分选就一定要无菌操作了。
质谱流式细胞技术简介
质谱流式细胞技术（mass cytometry，MC）就是将电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）应用到单个细胞的分析，原理是用纯化的单元素同位素标记抗体，然后使用ICP-MS检测该元素离子峰。该技术融合了流式细胞分选仪和ICP-MS。
技术的突破并非偶然，1959年，放射免疫测定技术奠定了基础，而Dmitry Bandura等科学家在2001年以过渡元素标记抗体的方式开启了质谱流式的新篇章。张新荣教授的稀土元素和胶体金免疫检测技术，虽早有贡献，但专利价值和商业应用的平衡还需时间打磨。
质谱流式细胞技术（Mass Cytometry）是利用质谱原理对单细胞进行多参数检测的流式技术。它继承了传统流式细胞仪的高速分析的特点，又具有质谱检测的高分辨能力，是流式细胞技术一个新的发展方向。
样本适应性与类型CyTOF主要适用于人源和小鼠源样本，涵盖外周血、骨髓、组织等多类型样本。它要求细胞质量高，尤其是对于外周和组织样本，建议在寄送前制成单细胞悬液，并经过梯度冻存和干冰运输，以减小长途运输中的损伤。
流式细胞术以多参数、高分辨率以及快速检测等优点而广泛应用于多个研究领域及临床诊断中，特别是免疫学研究。美中不足的是，在筛选未知细胞群时，传统流式细胞术容易陷入「盲人摸象」的尴尬。
流式细胞仪观察细胞周期样品怎样准备
取对数生长期的细胞，按1X106个/mL以1mL体积接种于6孔板内。培养24h后，加入不同浓度样品。在37 ℃、5 % 的CO2恒温箱中培养24h后终止。（2）细胞固定 胰酶消化并离心收集细胞（800rpm/min），弃上清，用预冷PBS洗细胞两次，加入预冷70％乙醇， -20℃固定保存。
PI）的PBS缓冲液中（PI buffer：4 mM 柠檬酸钠（Trisodium Citrate）， 65 mM NaCl， PI 20 mg/mL， 0.03% Nonidet P-40 ， 配于H 2 O中）；7 避光冰上孵育10 min，上流式细胞仪测定细胞存活率。
操作过程中，需轻柔处理以防止细胞脱落，消化细胞后培养48小时，再通过固定、染色和显微镜观察，计算分裂指数。接下来是BrdU参入法，这种方法通过标记DNA复制来追踪细胞周期。实验材料包括细胞、BrdU试剂和冰箱、显微镜。
样品于4℃下避光30分钟或最长不超过1个小时以备流式细胞仪分析。注意：延长在低渗缓冲液的曝光时间会引起样品碎片的增加。
流式细胞术,你这磨人的小妖精
1、流式细胞术（Flow Cytometry ，FCM）是一种对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒逐个进行快速定量分析和分选的技术。小妖精的成仙之路 样本类型 流式细胞仪可检测多种样本：外周血、骨髓、细胞穿刺液、洗脱液、实体组织、培养细胞、微生物。
2、最开始的出处是葫芦娃，是金刚葫芦娃对蝴蝶妹妹说的。
3、磨人的小妖精的意思是：讨人喜欢的人。也可以理解为“你这挑逗人的小妖精。”这是一句网络流行语。是表达对某人或者某物的喜爱之情的一种流行说法。网络流行语（network buzzword）是在网络上流行的语言，是网民们约定俗成的表达方式。