【五分钟讲实验】细胞转染实验技巧汇总
1、细胞状态和DNA质量是关键。优化转染条件，如使用Entranster试剂，同时避免使用抑制剂。细胞应处于健康状态，密度在70%以上，且DNA纯度需在8-0之间。RNA转染时，纯化和防止RNA酶污染是关键，同时选择适合的转染试剂。siRNA转染时，纯度、浓度控制和标记siRNA的使用有助于优化实验结果。
2、首先，转染前，贴壁生长的细胞需要通过胰酶处理成单细胞悬液，细胞密度应控制在70-90%或2×106-4×106细胞/ml，且最好在转染前4小时更换新鲜培养液。质粒DNA需要纯净，OD260/280比值大于8。在实验过程中，培养基中的血清和抗生素都可能影响转染效果。
3、物理介导的细胞转染技术包括显微注射技术、基因枪技术和电穿孔技术。显微注射技术适用于任何类型的细胞，但技术要求高，针头注射会对细胞造成损伤。基因枪技术操作简单，DNA用量少，但需要特殊的设备和金颗粒或钨颗粒价格昂贵。电穿孔技术操作简单，毒性低，转染效率高，适用于大规模细胞转染。
4、**细胞铺板**：通常在转染前一天进行，根据细胞生长速度计数后铺板，确保第二天转染时细胞密度达到80%~90%左右，以提高转染效率。 **细胞转染**：以lip2000为例，转染前更换无双抗、无血清的细胞培养基。用opti-mem稀释质粒或siRNA，同时用opti-mem稀释lip2000。
5、细胞转染过程包括准备转染试剂、选择合适的混合比例、在室温下混合、清洗培养板、加入混合液、培养细胞一小时、移除混合液或加入完全培养基继续培养。第二次细胞传代包括观察转染结果、记录绿色荧光蛋白表达情况、重新转入培养皿、在正常条件下培养、按照染色要求固定细胞。
6、操作步骤：将细胞与目标分子混合，置于电穿孔仪的电穿孔室中。施加特定的电脉冲，使细胞膜电穿孔，从而实现目标分子的导入。不同细胞类型和转染试剂之间的适用性和效果可能会有所差异。
繁毒细胞密度百分之多少合适
HepG2用lipo2000在我们实验室做的转染效率很高的，可以到70－80％，不必担心。
细胞密度达到80%~90%时．去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加人1ml DMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。
CCK-8实验是用来检测细胞毒性的，通常情况下，实验结果显示的存活率应该小于或等于100%。如果实验结果显示存活率大于100%，这可能是因为实验操作或数据处理出现了错误。 细胞存活率超过100%的情况在理论上是异常的，因为这意味着细胞在实验条件下不仅没有死亡，反而增加了。
细胞的存活率与百分之100之间无统计差异。根据查询知乎网得知，细胞毒性通常是指在某一个药物处理浓度下细胞的死亡率，所以在某个浓度下细胞的存活率与百分之100之间无统计差异，就说在该浓度下是无毒的。
选用低细胞毒性的转染试剂其实很重要。由于siRNA沉默时效性的影响，转染后48小时才能进行进行qRT-pcr检测，转染后48-72小时才能进行蛋白检测。
细胞最佳负载病毒的胞龄 MDCK细胞繁殖非常旺盛，必需只能提前一天将细胞培养瓶里的细胞接种在六孔板中，如果负载病毒用胞龄为两天的MDCK细胞，那么病毒培养的阳性率几乎为0，而胞龄为12-24h的MDCK细胞对病毒的负载阳性率区别不大[2]。
hepg2细胞siRNA转染条件?哪位大神指点一下。
通常情况下悬浮细胞转染效率较低，贴壁细胞的转染效率因细胞不同，有些很高有些很低。HepG2的DNA转染效率大概有50%，siRNA暂时没做过。如 果你有GFP质粒和针对GFP的siRNA共转染，用只转染GFP质粒的孔做对照，可以看出转染效率。
BMS2细胞系转染试剂：骨髓是大多数骨骼内部的柔性物质，在大骨骼中，它是新血细胞的来源。这类转染试剂是一种用于骨髓基质细胞（BMS） 的转染试剂。CAKI-1 细胞系转染试剂：主要用于肾癌细胞的转染试剂。Caki-1 细胞系可用于研究人类近端小管上皮。
针对 siRNA 递送优化的常用转染试剂 市场上的一些生物试剂公司通过siRNA 递送的优化也达到较理想的转染效果。比如： Thermo Fisher的Dharmafect 1 ，主要优化 SMARTpool siRNA 来转染 HepG2 细胞。 还有YEASEN的INTERFERin siRNA/miRNA体外转染试剂等可用来转染 Hela或RAW267 等细胞。
细胞黏附性对组织结构稳定、细胞功能调节、增殖分化等具有重要作用。实验通过改变siRNA转染浓度，观察Hep3B细胞在Matrigel胶上的黏附情况，分析细胞黏附性的改变。此过程包括细胞转染、细胞培养、细胞粘附实验及结果分析等步骤，以期揭示细胞黏附机制在不同条件下的变化。
COS-7细胞的电转染条件
在进行COS-7细胞的电转染过程中，Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪的配合是非常关键的。针对不同的电转杯尺寸，具体的电转条件有所差异：对于直径为0.2厘米的电转杯，建议细胞密度控制在5x10^6个细胞每毫升。在这样的密度下，DNA的使用量应为2微克，同时，电转液体积为100微升。
lipofectamin 2000用下来转染效率倒可以，就是毒性偏大，需要在转染后及时更换培养液，最近开始在用RFect，也是用24孔板做的，每孔1ug质粒，设置质粒转染试剂2ul，3ul，4ul三个梯度，每个梯度最好做2个复孔，为了避免实验误差），DNA 和试剂的比例在1：5左右。
结果 人BACE基因的cDNA已克隆到真核细胞表达载体pcDNA1质粒中；经脂质体转染COS-7细胞后，并由潮霉素进行筛选，可见转染细胞胞浆中和胞膜上有较高量的BACE蛋白表达。 结论 成功构建了pcDNA1-BACE的真核表达载体，为研究BACE基因在AD发病机制中的作用及抑制BACE，为治疗AD奠定一定的实验基础。
关于COS7细胞的简介以及背景，希望能够详细些，谢谢！我有更好的答案分享到： 1条回答 2012-10-11 16：15yanyana20|二级 COS-7是来源于非洲绿猴肾成纤维细胞并经SV40病毒基因转化的细胞系，能组成型地表达SV40 T抗原，使得任何复制启始位置带有SV40的转染质粒能够以很高的拷贝数进行复制。
好多同学都说RAW267细胞难转染，相关文献也提到RAW267细胞能做瞬转，我师姐实验室用RFect-siRNA方法转染COS-7细胞效果不错，我觉得转染RAW267细胞应该也可以，如果楼主考虑用电转的话需要控制好电场强度，电场强度过高会增加细胞的死亡率，实验前需要测定RAW267细胞的最佳电场强度。