人淋巴细胞分离液
1、洗涤步骤为去除血小板和血浆蛋白，进行以下步骤：吸取淋巴细胞层至干净离心管，减少杂质的混入。加入至少3倍体积的盐缓冲液（6ml）以稀释。用巴斯德吸管轻轻吹打，使细胞层与盐缓冲液充分混合，然后18-20°C，60-100g离心10分钟。
2、淋巴细胞分离液是一种在生物实验中广泛应用的试剂，它基于细胞密度差异，利用离心力实现细胞的分离与纯化。Ficoll淋巴细胞分离液与Percoll淋巴细胞分离液是常用的两种类型。它们皆采用密度梯度离心法分离单个核细胞。分离原理在于，外周血中单个核细胞和单核细胞与其它细胞在体积、形态和密度上有明显区别。
3、【答案】：B 单个核细胞的比重为075～090，红细胞和粒细胞的比重在092左右，选择一种比重介于075～092之间的分层液即可将细胞分离，一般Ficoll分层液的比重在077左右。
4、取新鲜抗凝血lml，与注射用生理盐水1：1混匀后，小心加于2ml的细胞分离液之液面上，以600-800g离心（半径15cm水平转子）20-30分钟，此时离心管中由上至下细胞分四层。第一层为血浆层（含血小板）。第二层为环状乳白色淋巴细胞（单核/单个核细胞层）。第三层为透明分离液层。
5、外周血中单个核细胞和单核细胞，其体积、形态和密度与其他细胞不同。淋巴细胞分离液是一种密度介于075∽090之间而近似于等渗的溶液，用它做密度梯度离心，使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。
如何配制一定密度的ficoll细胞分离液
1、血液样本（去纤维蛋白或添加抗凝剂）：2ml混合盐缓冲液：2ml（用等体积的蒸馏水溶解，再用10 N HCl调节pH至6，定容至1L）盐缓冲液（PBS或生理盐水）：根据需要配置每次实验需新鲜配置，盐缓冲液可在4℃保存一周。分离步骤 在开始前，轻轻摇晃淋巴细胞分离液以确保均匀混合。
2、淋巴细胞分离液的比重就是077不需要稀释，在一定离心力的作用下，比重大于淋巴细胞的红细胞及多核细胞等沉淀于分离液的底层，而淋巴细胞留在分离液的上界面。
3、在短中管中加入淋巴细胞分离液。 用肝素抗凝的外周血与Hanks液或RPMI1640混合，沿管壁缓慢加入分层液，离心2000rpm×20分钟。 分离出三层，上层是上清液，下层是红细胞和粒细胞，中层是淋巴细胞。通过毛细管刮取中间的云雾层，洗涤并收集单个核细胞。
4、密度梯度离心法是基于细胞密度不同进行分离。首先，将 Ficoll 溶液按一定比例配制，形成梯度。接着，将血液样本加入梯度中，离心后，密度不同的细胞将根据梯度分布。最后，通过移液枪吸取 PBMCs 层即可。流式细胞仪分选法利用细胞表面的特定标记物进行分离。
5、标准方法：Ficoll-泛影钠（Ficoll-Hypaque）密度梯度及红细胞裂解法1）取一50ml聚乙烯管，无菌采集人外周静脉血，加4ml8%或5%的柠檬酸盐液定容至40ml。上述全血300gX20min，离心， 室温。2）吸出富含血小板的上清，2500gX15min，制备无血小板血浆（platelet-poor Plasma， PPP）。
6、分离PBMC的常用方法是Ficoll密度梯度离心法，其具体步骤如下：准备分层液：在短中管中加入比重为077±0.001的聚蔗糖泛影葡胺分层液。混合血液与Hanks液：用肝素抗凝的外周血与Hanks液或RPMI1640按一定比例混合，然后沿管壁缓慢加入之前准备好的分层液中，以避免破坏分层。
Percoll分层液的简介
Percoll是经过聚乙烯吡咯烷酮 （polyvinyl pyrolidone， PVP） 处理的硅胶颗粒混悬液，对细胞无毒性和刺激性。Percoll混悬液的硅胶颗粒大小不一，经过高速离心后，可形成一个连续密度梯度，将比重不同的细胞分离纯化。
Percoll分层液法是一种连续密度梯度离心分离法，其分布由上至下依次为：死细胞和血小板层，富含单核细胞组分层，富含淋巴细胞的组分层及红细胞与粒细胞组分层。
该法是纯化淋巴细胞和单核细胞的一种较好的方法，淋巴细胞纯度高达98%，单核细胞纯度可达78%。
Percoll分层液法是一种连续密度梯度离心分离法。表层为死细胞残片和血小板，底层为粒细胞和红细胞，中间有两层，上层富含单个核细胞（75%），下层富含淋巴细胞（98%）。
E花环实验的原理
实验原理：人外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞（SRBC）受体，能够与SRBC结合形成花环样细胞团（即E花环）。此试验用于计数T细胞数量，可判断机体细胞免疫状况。
e花环实验原理如下：免疫学上用来检测T细胞数量的一种实验方法，T细胞表面具有能与绵羊红细胞（SRBC）表面糖肽结合的受体，称为E受体（CD2）。CD2是一种糖蛋白，相对分子质量为30000～60 000，已证实E受体是人类T细胞所特有的表面标志。当T细胞与SRBC混合后，SRBC便粘附于T细胞表面，呈现花环状。
当T细胞与SRBC混合后，SRBC便粘附于T细胞表面，呈现花环状。通过花环形成检查T细胞的方法，称为E花环形成试验。根据花环形成的多少，可测知T细胞的数目，从而间接了解机体细胞免疫功能状态，判断疾病的预后，考核药物疗效等。
熟悉光镜下E花环的形态和计数方法。实验原理 T细胞表面具有能与绵羊红细胞（SRBC）表面糖肽结合的受体，称为E受体（CD2）。已证实E受体是人类T细胞所特有的表面标志。当T细胞与SRBC混合后，SRBC便粘附于T细胞表面，呈现花环状。通过花环形成检查T细胞的方法，称为E花环形成试验。
【答案】：C 根据绵羊红细胞能结合T细胞形成E花环，使得T细胞-绵羊红细胞的密度大于B细胞的原理进行分离。
percoll分离液法常用来分离
1、Percoll分离液法常用来分离细胞。Percoll分离液法是一种密度梯度离心技术，其原理是不同种类的细胞具有不同的密度，在一定密度的Percoll分离液中，细胞会根据自己的密度停留在相应的位置，从而实现细胞的分离。
淋巴细胞分离液的分离原理是什么?
1、淋巴细胞分离液是一种在生物实验中广泛应用的试剂，它基于细胞密度差异，利用离心力实现细胞的分离与纯化。Ficoll淋巴细胞分离液与Percoll淋巴细胞分离液是常用的两种类型。它们皆采用密度梯度离心法分离单个核细胞。分离原理在于，外周血中单个核细胞和单核细胞与其它细胞在体积、形态和密度上有明显区别。
2、外周血中单个核细胞和单核细胞，其体积、形态和密度与其他细胞不同。淋巴细胞分离液是一种密度介于075∽090之间而近似于等渗的溶液，用它做密度梯度离心，使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。
3、密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理是：常用来分离人外周血单个核细胞（PBMC）的分层液比重是077±0.001的聚蔗糖（Ficoll）-泛影葡胺（Urografin）（F／H）分层液。Ficoll是蔗糖的多聚体，呈中性，_W水性高，平均分子量为400，000，当密度为2g／ml仍未超出正常生理性渗透压，也不穿过生物膜。
4、淋巴细胞分离掖是由60%的聚蔗糖2份和34%的泛影葡胺1份混合制成。它具有分子量大、无化学活性、20℃时比重为077士0.001的特性。血液中各种细胞的比重不同，淋巴细胞与单核细胞的比重约为070，而粒细胞和红细胞的比重为092左右。
5、一） 原理：使用比重为077±0.001的聚蔗糖（Ficoll）-泛影葡胺（Urografin）（F/H）分层液。红细胞和粒细胞因比重较大，离心后会沉在管底，而淋巴细胞和单核细胞比重较小，会浮在液面。通过吸取液面细胞，即可获取PBMC。（二） 实验步骤： 在短中管中加入淋巴细胞分离液。