细胞密度的稀释（细胞稀释倍数与密度关系）

CCK-8细胞实验原理及步骤

1、CCK8细胞实验原理：CCK8细胞实验是一种快速测定细胞增殖和毒性的方法。其原理基于WST8试剂被线粒体脱氢酶还原，生成的甲臜产物的颜色深浅与细胞活力正相关、与细胞毒性负相关。通过测定450nm波长下的OD值，可以反映活细胞的数量。

2、添加CCK-8：此步骤有两种实施方式。一种是直接向每个孔加入10ul的CCK-8溶液；另一种是使用含10%CCK-8溶液的培养基进行换液处理。注意加入过程切忌产生气泡。 孵育CCK-8：加药后，将实验板置于37°C、5%CO2的细胞培养箱中，继续孵育1-4小时。该环节所需时间由实验者根据实际效果自行确定。

3、原理： CCK8实验的核心原理是基于WST8在细胞内的脱氢酶催化下，会被转化为黄色的甲瓒染料。 这种颜色转换的深浅程度与活细胞的数量成正比，因此可以用来评估细胞的活力。步骤： 细胞接种：首先，将细胞计数并接种到预设的96孔板中，培养24小时以确保细胞适应环境并开始生长。

细胞计数除了【血球计数板】的方法之外还有其他方法么?听说是一种稀释...

我们是微生物方面的，如果对象是细菌，可以用稀释到平板法，用菌液稀释出一系列浓度梯度，用涂布棒将菌液均匀涂抹在培养皿中，适宜培养，查各梯度菌落个数，以三百菌落以下为最适。该法测的是菌落形成单位（CFU），并不是所有细胞个数。

在生物酵母菌的计数中，有两种常用方法：血球计数板计数与平板稀释法计数。血球计数板计数是一种直观的方法，它直接在显微镜下计数，能够得到单个细胞的总数，包括活细胞与死细胞。其计算公式为：N（cfu/ml）=单元格平均细胞数n*总单元格数（400）/总单元格体积（0.1mm^3）*稀释倍数。

显微镜计数法即血球计数法，事先把菌液稀释到一定的倍数，然后通过血球计数板在显微镜下计数。此法计数比较精准。

也可以用滴管直接将菌悬液滴加在计数区上（注意不要让计数区两边平台沾上菌悬液），然后盖上盖玻片（同样要避免气泡）。静置片刻后，将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳。先在低倍镜下找到计数区，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应适当减弱光照强度。

稀释涂布平板法是用稀释后，在培养基上形成菌落的方法来计算细菌等微生物的数量的方法。细胞计数法的用途：细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法，一般利用计数板（血球计数板）进行。既可用于分离细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，也可用于对培养物的细胞数量进行计数。

集落培养时细胞接种密度该怎么算?

如果是这样的话，先把母液稀释10000倍，细胞密度就是28X10^5。2X10^5/28X10^5=0.07752。从稀释液中取752微升，盐水补齐至300微升。平均分装到2个皿中。

根据细胞增殖能力，将细胞悬液倍比稀释。一般按照每皿含50、100、200个细胞的浓度分别接种5ml细胞悬液到培养皿（直径 60mm ）中，以十字方向轻轻晃动培养皿，使细胞分散均匀。（4）培养皿置 37℃ 、5%CO2中培养2~3周，中间根据培养液pH变化适时更换新鲜培养液。

取对数生长期的单层培养细胞，用0.25% 胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，把细胞悬浮在完全培养基中备用。将细胞悬液作梯度倍数稀释，以适当的细胞密度（根据增殖能力）接种于培养皿中。

接种密度控制在10~200个／ml。在计数准确，细胞活性正常的情况下，一般稀释为20个／ml，每孔接种200μl，这样每孔落人细胞数平均为1，获得单克隆生长孔的概率最大，数量最多。有些细胞的克隆化培养效果不理想的原因与它们在低密度下没有能力生存有关。

THP1细胞转染问题

对于24孔培养板的THP1细胞转染实验，关键步骤如下：首先，确保细胞状态适宜，转染前一天，将细胞接种在每孔500微升无抗生素的培养基中，让细胞密度达到30-40%。其次，为siRNA和RFectSP的混合物做准备：取6 pmol siRNA用50微升无血清培养基稀释，然后取2微升RFectSP用同样量的无血清培养基稀释。

准备细胞：确保THP-1细胞处于良好生长状态，并对其进行适当的分化诱导。 选择转染方法：根据目的基因大小和特性选择合适的转染方法，如电穿孔法、脂质体转染等。 制备转染试剂：按照所选方法准备相应的转染试剂和缓冲液。 转染操作：将目的基因与细胞混合，通过特定的方法将基因导入细胞内。

转染意义： THP1细胞转染在细胞生物学和医学研究中具有重要意义。它允许研究人员将特定的基因或分子导入细胞中，以研究这些基因或分子的功能、相互作用以及它们在疾病发生和发展中的作用。