细胞一定要贴壁后才能加药吗
博凌科为解一般文献报道的方法，是贴壁细胞在细胞贴壁后加药物（一般为上板后24h），而悬浮细胞是上板同时加。 但是，在操作中具体要根据实验本身要检测的指标来确定时间。
之后，加入浓度梯度的药物，原则上细胞贴壁后即可加药，或延迟两小时或半天，我们常在前一天下午铺板，次日上午加药，一般设置5-7个浓度梯度，每孔100ul，设3-5个复孔，以反映真实情况。孵育16-48小时后，倒置显微镜下观察，接着每孔加入20ul的MTT溶液（5mg/ml），继续培养4h。
降低细胞密度试试，在筛选前接种密度调成1000个/ml，贴壁后24小时加药，再做一次你的梯度实验。一般情况下，选择8-10天内全部死亡的浓度为好。如果这样还能形成细胞克隆点的话，可以100%的说明你的细胞混有潮霉素B抗性细胞。为了免去后续实验的麻烦，最好购买或再找人要个新的细胞。
5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板），加入浓度梯度的药物，原则上细胞贴壁后即可加药.一般5-7个梯度，每孔100ul，一行12个孔，两个PBS填充孔，两个对照孔，两个空白孔，6个复孔 5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。
mtt实验原理
1、MTT实验：原理： MTT实验利用细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶将外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜，并沉积在活细胞中。 死细胞不具备此功能，因此MTT结晶的形成量与活细胞数量成正比，可以间接反映活细胞数量。步骤： 细胞准备：进行细胞消化、离心、计数，并将细胞接种于96孔板中，在特定条件下培养。
2、MTT法是一种广泛应用于生物学研究中的细胞活性检测方法。其原理在于活细胞中的脱氢酶能够将MTT（四唑盐）还原成不溶于水的蓝紫色产物甲臜，并且这些产物会在细胞内部沉淀下来。然而，死细胞由于缺乏这种酶的功能，无法进行还原作用，因此无法形成沉淀。在此过程中，DMSO（二甲基亚砜）的作用不可忽视。
3、MTT分析细胞增殖实验的原理是：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臢并沉积在活细胞中，而死细胞则无此功能。二甲基亚砜能溶解这些甲臢，通过酶标仪测定溶解后甲臢的光吸收值，OD值与活细胞数量成正比，从而可以判断细胞活性。细胞活性越强，OD值越大。
细胞增殖检测——MTT法
1、细胞增殖检测中的MTT法是一种基于MTT噻唑蓝物质的检测方法，用于评估活细胞数目。其主要原理和特点如下：原理：MTT噻唑蓝在活细胞线粒体中的呼吸链作用下，tetrazolium环开裂生成蓝色的formazan结晶，其生成量与活细胞数目成正比。通过测定formazan结晶的OD值，可以反映活细胞数目。
2、MTT法，又称MTT比色法，是一种广泛应用于检测细胞存活和生长的常用方法。检测原理是，活细胞中的线粒体琥珀酸脱氢酶能够将外源性MTT还原成不溶于水的蓝紫色结晶甲臜，并沉积在细胞中。而死细胞则不具备这一功能。
3、MTT法：适用于各种类型的细胞，无论是悬浮细胞还是贴壁细胞。CCK8法：同样适用于多种细胞类型，但在某些特定情况下，如需要快速检测或细胞毒性较低的情况下，可能更具优势。操作步骤与便捷性：MTT法：操作步骤相对较多，需要溶解结晶甲臜，这可能增加实验复杂性和时间成本，同时可能影响结果精度。
4、综上所述，MTT法是细胞增殖检测中的一种有效方法，通过精确控制实验条件和参数，可以获得准确的细胞活力和增殖情况数据。在实验过程中，需注意细胞培养、MTT添加、反应时间、检测波长等关键步骤，以确保实验结果的可靠性。如果遇到问题，可以考虑替换为CCK-8实验，尽管其费用稍高，但操作更为简便。
5、在选择细胞增殖检测方法时，MTT法和CCK8法的选择应基于实验的具体需求和条件。以下是两者之间的对比及选择建议： 实验准确性与时间成本： MTT法：操作相对复杂，对实验条件要求严格，可能影响实验结果的准确性。但其应用广泛，适用于各种细胞类型，适合追求高准确性的实验。
6、在选择细胞增殖检测方法时，MTT法和CCK8法各有其适用场景，具体选择需根据实验目的、细胞类型、操作便捷性以及成本效益等因素综合考虑：实验目的与细胞类型：MTT法：适用于多种细胞类型和研究，尤其当实验需要检测细胞增殖且对操作复杂度不特别敏感时。
平板克隆实验怎么加药
铺满细胞后，加药培养两周，可见白点克隆时停止培养，用遇冷的甲醇固定细胞15min，结晶紫染色30分钟，用流动水清洗。
平板克隆形成实验细胞种进去再加药。有利于形成细胞群体称为细胞集落或克隆。每个克隆由单一细胞而来，含有50个以上细胞，大小在0.3-1mm之间。
博凌科为解做克隆形成实验首先需要在平皿或孔板中接种相同数量的处理过的细胞，所以需要计数细胞后再种于平皿或孔板中。如果在放疗之前就接种细胞，则经过放疗后，就 不能保证成活的细胞数量是相同的，因而在计算克隆形成率时分母则不一致。
药物过期：佐匹克隆可能过期，已经没有疗效。另外，任何的安眠药均不可长期服用，应间断使用，也不可自行加药，连续服用可能会产生耐药性和成瘾性。
帕金森病应该如何治疗 目前帕金森病的治疗仍然以药物治疗为主，通过药物维持患者体内多巴胺和乙酰胆碱的平衡，使患者的症状得以改善。在疾病早期无需药物治疗，应鼓励患者参加体育锻炼，但如果疾病已经影响到患者的日常生活，可以使用药物治疗。
mtt实验方法
1、MTT法实验步骤如下：首先，收集对数期细胞，调整浓度至1000-10000个细胞/孔，用100ul细胞悬液铺板于96孔平底板上，边缘孔用无菌PBS填充。细胞在5% CO2和37℃的环境下孵育，直至形成单层细胞。
2、准备阶段： 将单个细胞悬液接种到96孔板中，每孔细胞数量控制在100010000个之间。 接种后用常规培养条件进行培养，培养时间一般为35天，具体时间根据实验需求进行调整。 呈色阶段： 培养结束后，向每孔中加入MTT溶液。 孵育4小时后，小心去除上清液。
3、MTT法的局限：只能测定细胞相对数和活力，不能测绝对数，操作需无菌，避免细菌干扰。实验设置：包括调零孔、对照孔和加药孔，确保所有条件一致。避免血清干扰：尽量使用低血清浓度的培养液，以保持试验敏感性。
4、为了确保MTT法实验的准确性，MTT溶液的配制方法同样需要严格遵循规范。通常，MTT溶液是由一定浓度的MTT溶解于无菌蒸馏水中制备而成。在实验室中，一般使用0.5 mg/mL的MTT浓度作为标准，将MTT粉末溶于蒸馏水中，直至完全溶解。配制后的溶液应保持无菌状态，并在使用前现配现用。